強姦婬片A片AAA毛片Mv,少妇搡BBBB搡BBBB毛多多,国产精品嫩草久久久久yw193,国产成人精品 视频
中文
關(guān)于我們
主營(yíng)業(yè)務(wù)
技術(shù)平臺(tái)
學(xué)術(shù)交流
新聞中心
加入我們
主營(yíng)業(yè)務(wù)
表單填寫
*姓名
*電話
*郵箱
*公司
*留言信息
熙寧小課-第101期 | 蛋白生物標(biāo)志物基質(zhì)選擇的注意事項(xiàng)
發(fā)布作者:熙寧生物發(fā)布時(shí)間:2023-04-01

蛋白生物標(biāo)志物的檢測(cè)為患者提供了重要的臨床信息,為診斷、預(yù)后和藥效學(xué)提供指導(dǎo)。目前,常見(jiàn)蛋白生物標(biāo)志物檢測(cè)使用的體液樣本(基質(zhì))包括血清、血漿(含不同類型的抗凝劑)、尿液、腦脊液、細(xì)胞裂解液、糞便等。檢測(cè)時(shí),基質(zhì)的不同會(huì)影響分析的準(zhǔn)確性和結(jié)果的可靠性,但在藥物開(kāi)發(fā)階段,人們經(jīng)常是根據(jù)以往的經(jīng)驗(yàn)或文獻(xiàn)進(jìn)行基質(zhì)選擇,往往會(huì)忽視基質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物定量檢測(cè)的影響,未充分了解不同基質(zhì)間的差異。


本文淺談蛋白生物標(biāo)志物在不同基質(zhì)中的差異以及影響因素,為蛋白生物標(biāo)志物檢測(cè)的基質(zhì)選擇提供建議。

 

1.基于檢測(cè)目的進(jìn)行基質(zhì)選擇

 

臨床檢測(cè)中,應(yīng)根據(jù)不同的生物標(biāo)志物檢測(cè)目的來(lái)選擇不同的基質(zhì)。



血清和血漿是最常用的蛋白生物標(biāo)志物檢測(cè)基質(zhì)。血清是凝血反應(yīng)后的上層淡黃色透明液體(圖1)。在凝血反應(yīng)中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,血清中不再含有纖維蛋白原,也不含血小板,具有少量的凝血因子和因凝血產(chǎn)生的代謝物。血漿是血液從體內(nèi)取出后,加入抗凝劑進(jìn)行離心后得到的上層液體(圖1)。抗凝劑的存在阻斷了凝血鏈?zhǔn)椒磻?yīng),使凝血過(guò)程受阻,因此血漿中還存在纖維蛋白原。市面上最為常見(jiàn)的抗凝劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)、肝素、檸檬酸鈉(又名枸櫞酸)等。另外,CTAD(含檸檬酸、茶堿、腺苷和潘生丁的抗凝采血管)也常常被使用。這些抗凝劑可以防止血小板的活化和凝血的產(chǎn)生??傮w而言,血清和血漿樣本可用于各類細(xì)胞因子、趨化因子等蛋白生物標(biāo)志物的檢測(cè)。另外,血清樣本還可用于各種病毒抗體的檢查,包括丙肝病毒抗體、艾滋病病毒抗體、梅毒抗體檢查以及腫瘤標(biāo)記物等。血漿樣本還可用于檢查凝血酶的情況,通過(guò)凝血酶原時(shí)間來(lái)判斷用藥的劑量以及效果等。



尿液檢查可以檢查紅細(xì)胞、白細(xì)胞和尿蛋白、尿糖、尿膽紅素、HCG值等指標(biāo),從而判斷是否患有腎臟類疾病、是否存在泌尿系統(tǒng)疾病、是否血糖血壓正常、是否懷孕等情況。此外檢測(cè)尿液中的尿核基質(zhì)蛋白NMP22可用來(lái)輔助診斷膀胱癌。作為核基質(zhì)蛋白家族成員,NMP22在癌性尿路上皮細(xì)胞中表達(dá)量豐富,在惡性細(xì)胞凋亡后釋放到尿液中,導(dǎo)致濃度高于良性條件。



腦脊液(Cerebro-Spinal Fluid,CSF)為無(wú)色透明的液體,充滿在各腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)。腦脊液由腦室中的脈絡(luò)叢產(chǎn)生,與血漿和淋巴液性質(zhì)相似,略帶粘性。臨床上常使用腰椎穿刺術(shù)進(jìn)行腦脊液抽取。腦脊液的檢查對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷有著重要的作用,例如阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease,AD)通過(guò)檢測(cè)腦脊液的β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)、總Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白的含量來(lái)進(jìn)行診斷。



綜上所述,在臨床檢測(cè)中,需要根據(jù)檢測(cè)目的使用不同的基質(zhì)。在藥物開(kāi)發(fā)前期研究中,血清或血漿樣本更易獲得、能更直觀體現(xiàn)藥效等,因此成為使用和研究最多的生物標(biāo)志物檢測(cè)基質(zhì)。



 

a1.jpg

圖1 血漿與血清的區(qū)別

 

 

2.蛋白生物標(biāo)志物在血清與血漿中的差異

 

制備血清或者血漿時(shí),需要將人體內(nèi)的血液抽取出來(lái),此時(shí)的血管內(nèi)皮損傷,凝血程序被啟動(dòng),血小板將被激活。血小板為盤狀無(wú)核的細(xì)胞碎片,其相關(guān)蛋白質(zhì)超過(guò)5000個(gè),其中超過(guò)1000個(gè)蛋白質(zhì)在血小板激活時(shí)釋放。這些蛋白質(zhì)分布在各種血小板顆粒中,包括致密顆粒、α顆粒和溶菌酶顆粒(例如表1示例)。



檢測(cè)血小板活化和顆粒的釋放,可以通過(guò)測(cè)量血小板內(nèi)的蛋白質(zhì),如:ATP(致密顆粒)、血小板因子4、血管性血友病因子、人P選擇素(α顆粒)、水解酶(溶菌酶)。也可通過(guò)血小板活化后激活的其他標(biāo)記物來(lái)評(píng)估,如:表面人P選擇素(CD62p) 、血小板衍生微粒(PMP)、血小板-單核細(xì)胞聚集體(PMA)和可溶性人P選擇素。此外,通過(guò)測(cè)定聚合肌動(dòng)蛋白可知血小板是否完全破裂。肌動(dòng)蛋白是包括血小板在內(nèi)的許多細(xì)胞中組成性表達(dá)的細(xì)胞骨架蛋白,其以單體(g型)的形式存在于血小板內(nèi),當(dāng)它被釋放時(shí),會(huì)聚合(f型)并參與纖維蛋白凝塊的形成。因此,它可用于監(jiān)測(cè)血小板的活化/聚集。



很多臨床研究證實(shí),血清和血漿中許多蛋白生物標(biāo)志物的含量是不同的。血清與血漿中的蛋白差異主要來(lái)自血小板α顆?;蜓h(huán)細(xì)胞的分泌蛋白。這些分泌蛋白包括CCL5、CCL7、CCL17、CXCL5、IL-8、LCN2、PDGF-BB、TGFβ1、VEGF、TNFα和TNFSF14等。以上蛋白在血清的含量比血漿中高,可能是因?yàn)槠涫怯桑ㄔ谀^(guò)程中)血小板α顆?;蜓h(huán)細(xì)胞分泌的。其中,VEGF(vascular endothelial growth factor)稱為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子,具有促進(jìn)血管通透性增加、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和血管形成等作用。VEGF在腫瘤檢測(cè)中發(fā)揮著重要的作用,血清中的VEGF的水平受樣品中的血小板的量、樣品處理方式、時(shí)間、凝血過(guò)程、溫度等因素的影響,限制其在腫瘤檢測(cè)中的價(jià)值;而檢測(cè)血漿中的VEGF則能較為客觀地反應(yīng)腫瘤組織分泌VEGF的情況,故一般使用血漿作為基質(zhì)進(jìn)行檢測(cè) 。對(duì)于凝血過(guò)程中血小板活化后釋放的或循環(huán)細(xì)胞分泌的蛋白標(biāo)志物檢測(cè),建議選用含少量血小板或無(wú)血小板的血漿樣本。

 

表1: 血小板蛋白質(zhì)類別

a2.png

 

 

 

3. 肝素與EDTA血漿:不同抗凝劑的影響

 

血漿抗凝劑的抗凝機(jī)制大致歸為兩種:(1)肝素作為抗凝劑,可有效抑制凝血酶活性; (2) EDTA和檸檬酸鹽螯合血液中游離的鈣和鎂離子,使凝血酶失去活性,中斷凝血。這兩種離子都是激活內(nèi)源性和外源性凝血反應(yīng)必需的。EDTA是一種不可逆的螯合劑,而檸檬酸的抗凝作用會(huì)因鈣的添加而逆轉(zhuǎn),因此,可在檸檬酸鈉的血漿中進(jìn)行可控的凝血研究。



2002年,WHO發(fā)表一份報(bào)告《USE OF ANTICOAGULANTS IN DIAGNOSTIC LABORATORY INVESTIGATIONS》, 對(duì)200多種的分析物(化學(xué)物質(zhì)、細(xì)胞、可溶性蛋白)進(jìn)行了抗凝劑的推薦。



通過(guò)比較肝素和EDTA血漿,發(fā)現(xiàn)許多蛋白質(zhì)的含量在兩者體系中相近,但也存在某些蛋白質(zhì)(如CCL5, CXCL5和CXCL11)的含量差異較大。CCL5、CCL7、CXCL11和CXCL5均為與肝素能夠結(jié)合的蛋白,在肝素血漿中,這些蛋白在Ca2+的作用下與肝素結(jié)合,導(dǎo)致這四種蛋白質(zhì)含量在肝素和EDTA血漿中的含量是不同的。若在肝素血漿中去除肝素,這些蛋白質(zhì)會(huì)因肝素的缺失而使其構(gòu)象發(fā)生改變,從而影響它們的檢測(cè)。



此外,中心粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)會(huì)因抗凝劑的不同在血漿中呈現(xiàn)不同的水平,NE在肝素血漿中的含量高于EDTA血漿。從目前的研究來(lái)看,抑制劑α-1蛋白酶抑制劑(α-1PI)可與中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶結(jié)合,形成一種抗變性復(fù)合物,使NE水解活性失活。肝素能顯著降低NE與α-1PI的結(jié)合,表明肝素的存在會(huì)使 α-1PI 中釋放更多的彈性蛋白酶,這可能是導(dǎo)致肝素血漿中中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶水平較高的原因。此外,嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子家族成員在肝素血漿與EDTA血漿呈現(xiàn)的含量也不一致,研究表明,肝素結(jié)合嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子家族成員進(jìn)而防止其在體內(nèi)裂解和失活 , 而EDTA則不具有同樣的效果。這些例子表明抗凝劑可能影響某些蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,從而導(dǎo)致對(duì)蛋白質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果發(fā)生改變。



生物標(biāo)志物在藥物開(kāi)發(fā)和研究中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用,本文對(duì)蛋白生物標(biāo)志物檢測(cè)的基質(zhì)選擇提出幾點(diǎn)建議:1.對(duì)于檢測(cè)免疫細(xì)胞中的或在凝血過(guò)程中血小板釋放的蛋白標(biāo)志物,建議選用含少量血小板或無(wú)血小板的血漿樣本,推薦使用CTAD或者ACD抗凝劑。因?yàn)檫@些抗凝劑對(duì)血小板激活的影響最??;2. 慎重選擇抗凝劑以減少因抗凝劑對(duì)蛋白標(biāo)志物的裂解作用,因?yàn)樵谀^(guò)程中會(huì)釋放或激活蛋白酶,而這些蛋白酶會(huì)降低蛋白標(biāo)志物的活性和可能改變其結(jié)構(gòu);3.肝素會(huì)結(jié)合許多蛋白標(biāo)志物,并改變其結(jié)構(gòu),穩(wěn)定性等,因此在考慮將肝素作為抗凝劑時(shí),也應(yīng)評(píng)估潛在的影響。

 

 

 

參考資料

 

1. Dupin M, Fortin T, Larue-Triolet A, Surault I, Beaulieu C,Gouel-Chéron A, et al. Impact of serum and plasma matrices on the titration of human inflammatory biomarkers using analytically validated SRM assays. J Proteome Res.2016;15(8):2366–78.



2. Carey RN, Jani C, Johnson C, Pearce J, Hui-Ng P, Lacson E.Chemistry testing on plasma versus serum samples in dialysis patients: clinical and quality improvement implications. Clin J Am Soc Nephrol. 2016;11(9):1675–9.



3. Smith SA, Travers RJ, Morrissey JH. How it all starts: initiation of the clotting cascade. Crit Rev Biochem Mol Biol.2015;50(4):326–36.



4. Joel A. Mathews, Yan G. Ni, Connie Wang, et al.Considerations for Soluble Protein Biomarker Blood Sample Matrix Selection. The AAPS Journal (2020) 22:38.



5. Assoian RK, Sporn MB. Type beta transforming growth factor in human platelets: release during platelet degranulation and action on vascular smooth muscle cells. J Cell Biol.1986;102(4):1217–23.



6. Salanga CL, Dyer DP, Kiselar JG, Gupta S, Chance MR,Handel TM. Multiple glycosaminoglycan-binding epitopes of monocyte chemoattractant protein-3/CCL7 enable it to function as a non-oligomerizing chemokine. J Biol Chem. 2014;289(21):14896–912.



7. Seo Y, Schenauer MR, Leary JA. Biologically relevant metalcation binding induces conformational changes in heparin oligosaccharides as measured by ion mobility mass spectrometry.Int J Mass Spectrom. 2011;303(2–3):191.



8. Scholman RC, Giovannone B, Hiddingh S, Meerding JM,Malvar Fernandez B, van Dijk MEA, et al. Effect of anticoagulants on 162 circulating immune related proteins in healthy subjects. Cytokine. 2018;106:114–24.



9. Fischer JE, Janousek M, Fischer M, Seifarth FG, Blau N,Fanconi S. Effect of collection and preprocessing methods on neutrophil elastase plasma concentrations. Clin Biochem.1998;31(3):131–6.



10. Frommherz KJ, Faller B, Bieth JG. Heparin strongly decreases the rate of inhibition of neutrophil elastase by alpha 1-proteinase inhibitor. J Biol Chem. 1991;266(23):15356–62.



11. Ellyard JI, Simson L, Bezos A, Johnston K, Freeman C, Parish CR. Eotaxin selectively binds heparin: an interaction that protects eotaxin from proteolysis and potentiates chemotactic activity in vivo. J Biol Chem. 2007;282(20):15238–47.

專屬客服
免費(fèi)通話
表單填寫
回到頂部
国产精品无码人妻无码色情多人 | 偷窥国产肥熟女一区二区 | 91无码人妻一区二区三区 | 鲁大师成人A片免费高清 | 国产黄色视频网站在线观看视频网站 | 操老女人91老熟女老妇女 | 精品国产免费一区二区三区香蕉 | 内射毛片内射国产夫妻 | 在线观看免费一级黄色视频 | AA鲁丝片一区二区免费看 | 国产永久免费裸体美女 | 久久久久人妻一区二区三区 | 丰满人妻一 A片免费 | 精品无码人妻一区二区免费蜜桃p | 国产一级毛片一级A片酒瓶 五十老熟妇乱子伦免费章节 | 茄子一级大黄A片视频 | 情趣网站在线观看永久 | 国产一级a毛一级a爰片 | 国产成人精品一区 | 黄色免费在线观看视频 | 日本久久免费一二三四区 | 亚洲国产探花一区在线观看 | 91网站永久免费看 | 国产传媒免费在线观看 | 久久久久久久极品内射 | 国产人妻无套一区二区普通话对白 | 欧美性受XXXX黑人XYX性爽 | 国产一级a毛一级毛片 | 小向美奈子乳巨码在线播放 | 在线观看国产高清无码 | 狠狠躁夜夜躁人人爽蜜桃 | 潮喷搜索结果 - x99AV | 亚洲熟女少妇在线观看 | 麻豆影院寂寞护士 | 又黄又粗水大久久 | 麻豆mv视频免费播放 | 91中文字幕在线观看 | 看黄色片一级的中国的 | 又粗又大又黄A片免费看樱花 | A片男女色情A片免费姬媚直播 | 亚洲精品少妇18禁网站 |